(资料图片)

新冠疫情以来，新冠核酸快速检测技术逐渐走进了人们的视野中， 人们对于新冠核酸快速检测的认识也越来越多。 新冠核酸快速检测是属于分子诊断的技术中的一种，它是通过DNA复制的特性，在体外对于某段特定的核酸片段进行指数级的复制，将少量的核酸大量复制，通过复制过程中与标记了荧光探针的信号片段结合，并使得荧光化合物脱落发出荧光信号的有无、强弱来判断是否感染该病毒。

但是分子诊断中除了核酸检测以外，还有有非常多的技术都是针对基因水平进行检测的。 今天我们一起来看一下这其中一种创新的检测技术——数字PCR。那都是PCR技术它们有什么不一样呢？

PCR技术，按照PCR技术的演进，人们习惯性的将PCR技术划分为三代：普通PCR技术，实时荧光定量PCR技术和数字PCR技术。

荧光PCR目前有两种比较常见的方法，一是荧光染料法，二是荧光探针法。 荧光染料法是通过DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合，在游离的状态下，DNA结合染料会发出微弱的荧光， 但是与双链DNA一旦结合，它的荧光信号就会增加1000倍。 利用这种特性就能判断或真产物的量。 但是由于染料是与DNA的非特异性结合，所以可能会产生假阳性的结果。 而荧光探针法则是在PCR扩增的时候加入一对引物的，同时再加入一个特异性的荧光探针，荧光探针的两端标记一个荧光报告基团和一个荧光猝灭基团，当特异性片段在扩增时。 Ta q酶的酶活性就会将探针的酶切降解，然后报告荧光信号，在没扩增一条DNA链，就会形成一个荧光分子，使得荧光信号与PCR产物形成同步，新冠核酸检测就是通过这个方法进行的。

数字PCR是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR能够直接读出DNA/RNA分子的个数，是对起始样品核酸分子的绝对定量。数字PCR是把反应体系均匀分配到大量反应单元中，根据“泊松分布”原理，每个反应单元中不包含或包含一个到多个目的核酸序列。然后在每个反应单元中独立地进行PCR扩增，目标分子被扩增后会产生荧光信号，反应结束后将有信号的反应单元计为阳性；而不含目标分子的产物，不会发生PCR扩增，则计为阴性。

最后通过“泊松分布”和荧光信号阳性的反应单元占所有反应单元的比例计算出样本中目标核酸分子的拷贝数，从而实现绝对定量检测。

目前新冠核酸快速检测仍然使用的是荧光PCR技术，因为荧光探针法是目前相对经济且便利的方法，相信通过技术的不断发展，PCR技术仍会有不同程度的提升！